Figura 2 . Caracterização das mutações identificadas nos pacientes . ( A ) Localização das mutações no gene TBX5 . Os exões estão representados por caixas azuis e os intrões por linhas . ( B ) Consequência das mutações na proteína TBX5 . Na estrutura da proteína estão representados o domínio T-box , o domínio de transativação ( TAD ), o sinal de exportação nuclear ( NES ) e os sinais de localização nuclear ( NLS ). As linhas tracejadas indicam as regiões ausentes nas proteínas TBX5 mutantes . Os números referem-se às posições dos aminoácidos nas fronteiras dos domínios de proteína indicados .
Análise funcional das novas mutações
A proteína TBX5 é um fator de transcrição e , portanto , tem de ser translocada para o interior do núcleo para cumprir a sua função . Através de ensaios imunocitoquímicos que permitem a localização intracelular de proteínas , observou-se que a proteína TBX5 mutante do paciente B se encontra predominantemente localizada no núcleo assim como a proteína TBX5 do tipo selvagem . Por outro lado , a proteína mutante do paciente A , apesar de maioritariamente detetada no núcleo , também foi observada em parte no citoplasma . De seguida testámos a capacidade das proteínas mutantes de ativar a transcrição de um gene alvo , o NPPA . Como esperado , o TBX5 de tipo selvagem ativou fortemente a transcrição do NPPA . Contrariamente , ambas as proteínas mutantes não foram capazes de ativar a transcrição do NPPA ( Fig . 3 ).
Conclusão
Neste estudo foram identificadas novas mutações no gene TBX5 que levam à produção de proteínas truncadas ( mais curtas ) com grave perda de função e provavelmente responsáveis pela manifestação da doença . A ausência de problemas cardíacos no paciente A apoia a existência de outros mecanismos
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