Resultados e Discussão
No método isocórico , caracterizado como um processo que ocorre a volume constante , um recipiente resistente à pressão foi completamente cheio com a solução de insulina e , após ter sido hermeticamente fechado , foi colocado a - 20 ° C ( Fig . 1 ). Como o recipiente foi completamente cheio com a solução de insulina , não existe espaço livre para ocorrer aumento de volume e , consequentemente , a solução aquosa de insulina não congela . O gelo ocupa mais volume que a água líquida e , não havendo espaço livre no interior do recipiente , não ocorre formação de gelo . Portanto , com o método isocórico podemos estudar o que acontece à função da insulina quando esta é colocada a -20 ° C em diferentes condições físico-químicas sem ocorrer formação de gelo .
Figura 1 . Representação esquemática do sistema “ Cold Stability Accelerated System ” desenvolvido pela Smartfreez Lda ( A ), usado para efetuar o arrefecimento em condições isocóricas ( B ).
Western blot método em biologia molecular e bioquímica para detetar proteínas numa amostra biológica , baseado numa eletroforese em gel , transferência para membrana e deteção da proteína alvo por anticorpos específicos
A solução permanece líquida e os processos que conduzem à perda da estrutura nativa da insulina e consequentemente da sua função , devido à temperatura de -20 ° C , tornam-se muito mais rápidos numa solução líquida do que numa matriz de gelo . Esta circunstância permite otimizar as condições físico-químicas de armazenamento da insulina num período de tempo muito mais curto comparado com o que aconteceria se ocorresse formação de gelo . Para estudar a função da insulina fresca ( sem ser submetida a baixas temperaturas ) e após armazenamento a -20 ° C em condições isocóricas , usouse a linha celular de células humanas hepáticas HepG2 isoladas de um cancro do fígado . O fígado é um dos principais órgãos onde a insulina , produzida no pâncreas , atua . Esta linha celular tem algumas funções do fígado humano e tem sido muito usada para estudar o efeito da insulina in vitro ( Huang et al ., 2015 ). Quando entra nas células humanas , a insulina , se estiver funcional , provoca a fosforilação da enzima cinase Akt1 ( p-Akt1 ) ( Kim et al ., 1999 ). Usando a técnica de western blot é possível medir a quantidade relativa de Akt1 fosforilada e compará-la com a quantidade total de cinase Akt1 que existe nas células . A razão p-Akt1 / Akt1 nas células HepG2 é assim uma medida da
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