de forma a melhor compreender o processo da neurogénese após lesão .
Figura 1 . Proteínas alvo de S-nitrosilação . Representação esquemática da localização das proteínas alvo de S-nitrosilação ( elementos a laranja ), as quais estão associadas à via de sinalização ERK1 / 2 / MAPK ( elementos a azul ), envolvida na neurogénese e na proliferação celular .
Identificação de proteínas alvo de S-nitrosilação , em células estaminais neurais
Cultura de células processo pelo qual as células são cultivadas em laboratório sob condições controladas , de forma aproximada ao seu ambiente natural
LC-MS / MS método usado para detetar e identificar proteínas e modificações póstraducionais
Para identificar as proteínas alvo de S-nitrosilação nas células estaminais neurais , foi utilizada uma cultura de células , sendo estas provenientes do nicho neurogénico da SVZ . Estas células foram tratadas com um composto ( nitrosocisteína ) que promove a formação de nitrosotiol e seguidamente foi feita uma análise do perfil proteico destas células . Uma vez que as células são compostas por um número elevado de proteínas , recorreu-se a uma técnica de separação de proteínas , a eletroforese bidimensional em gel ( 2-DE ). Esta técnica permite separar as proteínas em função do seu tamanho e da sua carga , e depois identificar sinais diferenciados , através de fluorescência , nas amostras que correspondem a proteínas ou grupos de proteínas que estão modificadas por S-nitrosilação ( Fig . 2 ). De seguida , para determinar a identidade destas proteínas , isolaram-se os pontos do gel onde se detetaram sinais que correspondem à modificação por S-nitrosilação e as amostras foram analisadas pela técnica LC- MS / MS para serem identificadas .
Após a identificação , foi feita a análise das funções de cada proteína , incluindo o seu papel nas vias de sinalização envolvidas
7