Valorização do subproduto“ cartilagem do osso da quilha” através da otimização da extração de colágeno
seguida, para a realização da reação de cor foi adicionado em tubo de ensaio 2 mL do filtrado e 1 mL da solução oxidante, agitou-se em vórtex e deixou em repouso por exatos 20 minutos à temperatura de 25 ± 2 º C. Logo após se adicionou 1 mL da solução Ehrlich( 10 g de p-DABA em 35 mL de ácido perclórico 60 % e 65 mL de isopropanol), homogeneizou-se em vórtex e o tubo foi submetido à temperatura de 60 ° C em banho maria, por 15 minutos. Resfriou-se em água corrente por pelo menos 3 minutos. Posteriormente, foi realizada a leitura da absorbância em espectrofotômetro ultravioleta digital( Quimis, Modelo Q798U, São Paulo, Brasil) das soluções contra o branco de reagentes a 558 nm. A quantificação foi realizada através de uma solução estoque de hidroxiprolina a 6 µ g / L, em um intervalo de concentração variando de 0,6 µ g / mL a 4,8 µ g / mL. Os tecidos conjuntivos colagenosos dos animais contêm aproximadamente 12,5 % de hidroxiprolina, desta forma o conteúdo de colágeno por 100g de amostra foi obtido multiplicando-se o teor de hidroxiprolina por 8.
‣ Perfil eletroforético
Foi realizado utilizando-se a técnica descrita por Laemmli( 1970). O gel de aplicação( stacking gel) foi preparado na concentração de 3,5 % de poliacrilamida em tampão Tris- HCl 0,5 mol / L, pH 6,8 e SDS a 1 %, enquanto que o gel de separação foi montado formando um gradiente de 7,5 a 17,5 % de poliacrilamida em tampão Tris- HCl 3,0 mol / L, pH 8,8 e SDS a 1 %. A corrida realizou-se sob amperagem constante( 25 mA) e ao final da corrida, o gel foi retirado da placa e fixado em TCA 12,5 % por uma hora, sendo então corado com Coomassie brilliant blue R- 250 a 0,005 %. A remoção do excesso de corante realizou-se com o auxílio de uma solução descorante de metanol, ácido acético e água( 1:3,5:8 v / v / v). Os pesos moleculares das frações proteicas foram comparados mediante a utilização de marcador de peso molecular( GE Healthcare Life Sciences, Piscataway, NJ, USA).
Caracterização do colágeno extraído da cartilagem do osso da quilha do frango
‣ Rendimento em colágeno
O rendimento em colágeno foi obtido por análise da quantificação do aminoácido hidroxiprolina, seguindo a metodologia descrita pela( AOAC, 2010) e detalhada no item 3.2.2.
‣ Percentual de extração de colágeno
O percentual de extração de colágeno em relação à matéria prima(%) foi expresso pela relação: % colágeno = [ colágeno bruto obtido da extração com ácidos orgânicos da cartilagem da quilha de frango / colágeno bruto da cartilagem do osso da quilha do frango ] x 100.
‣ Perfil eletroforético
Foi realizado utilizando-se a técnica descrita por Laemmli( 1970), conforme descrita anteriormente.
‣ Determinação de cor A cor de colágeno bruto liofilizado extraído da cartilagem do osso da quilha foi medida utilizando um colorímetro Konica Minolta( Modelo CR-400, Osaka, Japão). Para leitura dos parâmetros L *( luminosidade), a *( intensidade de vermelho / verde) e b *( intensidade de amarelo / azul), foram fixadas as seguintes condições: iluminante C, ângulo de visão 8 °, ângulo padrão do observador 10 °, especular incluída, conforme especificações da Comission Internationale de L’ éclairage( CIE, 1986). Antes da realização das leituras o instrumento foi calibrado colocando o cabeçal do medidor verticalmente sobre o centro da placa de calibração branca( Iluminante C: Y = 92,84 X = 0,3136, y = 0,3201).
Análise estatística
A análise estatística dos dados de extração de colágeno por ácidos orgânicos foi realizada por meio do Delineamento Inteiramente Casualizado( DIC) utilizandose o software Sistema de Análise Estatística
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