Valorização do subproduto “ cartilagem do osso da quilha ” através da otimização da extração de colágeno
seguida , para a realização da reação de cor foi adicionado em tubo de ensaio 2 mL do filtrado e 1 mL da solução oxidante , agitou-se em vórtex e deixou em repouso por exatos 20 minutos à temperatura de 25 ± 2 º C . Logo após se adicionou 1 mL da solução Ehrlich ( 10 g de p-DABA em 35 mL de ácido perclórico 60 % e 65 mL de isopropanol ), homogeneizou-se em vórtex e o tubo foi submetido à temperatura de 60 ° C em banho maria , por 15 minutos . Resfriou-se em água corrente por pelo menos 3 minutos . Posteriormente , foi realizada a leitura da absorbância em espectrofotômetro ultravioleta digital ( Quimis , Modelo Q798U , São Paulo , Brasil ) das soluções contra o branco de reagentes a 558 nm . A quantificação foi realizada através de uma solução estoque de hidroxiprolina a 6 µ g / L , em um intervalo de concentração variando de 0,6 µ g / mL a 4,8 µ g / mL . Os tecidos conjuntivos colagenosos dos animais contêm aproximadamente 12,5 % de hidroxiprolina , desta forma o conteúdo de colágeno por 100g de amostra foi obtido multiplicando-se o teor de hidroxiprolina por 8 .
‣ Perfil eletroforético
Foi realizado utilizando-se a técnica descrita por Laemmli ( 1970 ). O gel de aplicação ( stacking gel ) foi preparado na concentração de 3,5 % de poliacrilamida em tampão Tris - HCl 0,5 mol / L , pH 6,8 e SDS a 1 %, enquanto que o gel de separação foi montado formando um gradiente de 7,5 a 17,5 % de poliacrilamida em tampão Tris - HCl 3,0 mol / L , pH 8,8 e SDS a 1 %. A corrida realizou-se sob amperagem constante ( 25 mA ) e ao final da corrida , o gel foi retirado da placa e fixado em TCA 12,5 % por uma hora , sendo então corado com Coomassie brilliant blue R - 250 a 0,005 %. A remoção do excesso de corante realizou-se com o auxílio de uma solução descorante de metanol , ácido acético e água ( 1:3,5:8 v / v / v ). Os pesos moleculares das frações proteicas foram comparados mediante a utilização de marcador de peso molecular ( GE Healthcare Life Sciences , Piscataway , NJ , USA ).
Caracterização do colágeno extraído da cartilagem do osso da quilha do frango
‣ Rendimento em colágeno
O rendimento em colágeno foi obtido por análise da quantificação do aminoácido hidroxiprolina , seguindo a metodologia descrita pela ( AOAC , 2010 ) e detalhada no item 3.2.2 .
‣ Percentual de extração de colágeno
O percentual de extração de colágeno em relação à matéria prima (%) foi expresso pela relação : % colágeno = [ colágeno bruto obtido da extração com ácidos orgânicos da cartilagem da quilha de frango / colágeno bruto da cartilagem do osso da quilha do frango ] x 100 .
‣ Perfil eletroforético
Foi realizado utilizando-se a técnica descrita por Laemmli ( 1970 ), conforme descrita anteriormente .
‣ Determinação de cor A cor de colágeno bruto liofilizado extraído da cartilagem do osso da quilha foi medida utilizando um colorímetro Konica Minolta ( Modelo CR-400 , Osaka , Japão ). Para leitura dos parâmetros L * ( luminosidade ), a * ( intensidade de vermelho / verde ) e b * ( intensidade de amarelo / azul ), foram fixadas as seguintes condições : iluminante C , ângulo de visão 8 °, ângulo padrão do observador 10 °, especular incluída , conforme especificações da Comission Internationale de L ’ éclairage ( CIE , 1986 ). Antes da realização das leituras o instrumento foi calibrado colocando o cabeçal do medidor verticalmente sobre o centro da placa de calibração branca ( Iluminante C : Y = 92,84 X = 0,3136 , y = 0,3201 ).
Análise estatística
A análise estatística dos dados de extração de colágeno por ácidos orgânicos foi realizada por meio do Delineamento Inteiramente Casualizado ( DIC ) utilizandose o software Sistema de Análise Estatística
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