Kit para decorionação de embriões de peixe-zebra (Danio rerio)
utilizando peptidases do látex de Calotropis procera
um grande avanço no conhecimento
da embriogênese e do ciclo de vida dos
vertebrados (CARVALHO et al., 2006).
Outros atributos práticos fazem
com que o peixe-zebra esteja cada vez mais
ganhando um espaço nos laboratórios que
outrora eram ocupados apenas pelos modelos
tradicionais, como a mosca-das-frutas
(Drosophila melanogaster), o rato (Rattus
norvegicus) e o camundongo (Mus musculus).
Dentre as principais vantagens do uso do
peixe-zebra podem ser destacadas o pequeno
espaço requerido para criação e manutenção,
o baixo custo e a praticidade para triagens
em larga escala. Dessa forma, pode-se dizer
que o peixe-zebra é um animal que combina
a relevância de ser um vertebrado na escala
de um invertebrado (CARVALHO et al., 2006).
Atualmente, uma ampla gama
de testes com diferentes compostos de
interesse tem sido realizada com embriões
de peixe-zebra e não mais com os adultos
dessa espécie. O uso de embriões apresenta-
se como uma alternativa aos testes agudos
com juvenis e adultos, possibilitando, dessa
forma, a redução/substituição do uso desses
organismos na experimentação anima l.
Como principais vantagens do uso dos
embriões apontam-se o desenvolvimento
embrionário rápido, a grande quantidade
de embriões produzida (média de 50 ovos/
casal) e seu pequeno tamanho (HENN;
BRAUNBECK, 2011).
O córion é um envelope acelular
que envolve os óvulos maduros de peixes
teleósteos. No entanto, essa característica
biológica tem dificultado à aplicação de
embriões de peixe-zebra em determinadas
áreas
de
pesquisa
como
discutido
anteriormente, pois essa membrana é
tida como uma barreira à interação entre
o embrião e moléculas de alta massa
molecular. Somente atravessam o córion
moléculas com massa molecular < 1 kDa
(HENN; BRAUNBECK, 2011). Sendo assim, é
necessária que seja feita a decorionação do
embrião com proteases, o que envolve um
custo elevado, uma alta taxa de mortalidade
e baixa reprodutibilidade dos métodos de
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Série Iniciados v. 23
decorionação. Ademais, não está disponível
no mercado nenhum kit para decorionação
enzimática de embrião de peixe-zebra, o que
abre a oportunidade para o desenvolvimento
desse produto. Para que esse produto seja
acessível do ponto de vista econômico a(s)
enzima(s) utilizada(s) para decorionação
devem ter baixo custo de aquisição/produção.
Nesse sentido, as peptidases isoladas do
látex da espécie vegetal C. procera podem
ser uma boa alternativa. C. procera é uma
planta abundante no semiárido nordestino
e o processo de obtenção das peptidases é
muito fácil e de baixo custo. Por isso, essas
enzimas têm sido propostas para diversos
usos, dentre eles para uso na coagulação de
leite para produção de queijo e na curtição
de couro (SILVA, 2016). Assim, as peptidases
de C. procera podem integrar um kit para
decorionação de embriões de peixe-zebra,
aliando eficiência e baixo custo.
Metodologia e Análise
Peixes adultos e embriões de peixe-zebra
Embriões de peixe-zebra (D. rerio)
com 4 h pós-fertilização (hpf) e provenientes
de uma linhagem do tipo selvagem foram
fornecidos pelo Laboratório de Biotecnologia
de
Organismos
Aquáticos
(LaBOrA),
coordenado pelo Prof. Ian Porto Gurgel
Amaral, do Centro de Biotecnologia, da
Universidade Federal da Paraíba (UFPB). Os
embriões foram rapidamente transportados
em béqueres contendo água dos aquários de
manutenção dos parentais e em um isopor
fechado até o Laboratório de Avaliação de
Risco de Novas Tecnologias (LabRisco), no
Departamento de Biologia Molecular da
UFPB, que é coordenado pelo orientador
deste plano.
No LabRisco, os embriões foram
mantidos em ambiente com temperatura
controlada (26 ± 1 ºC). Os embriões foram
analisados quanto ao estágio e normalidade
do desenvolvimento embrionário, utilizando
um estereomicroscópio, num aumento de 80
X. Embriões empregados na experimentação
ou excedentes, foram crioeutanasiados, e
depois, conduzidos para incineração. Todos