Kit para decorionação de embriões de peixe-zebra (Danio rerio)
utilizando peptidases do látex de Calotropis procera
como são escassos os estudos voltados a
aprofundar os conhecimentos sobre as
condições macro e microambientais e de
manejo adequados para esta espécie. Há
também uma carência de produtos no
mercado de insumos científicos que possam
auxiliar pesquisadores nos procedimentos
que vão desde à criação do peixe-zebra até a
sua utilização em experimentos específicos
(CARVALHO et al., 2006). Foi neste contexto
que o presente plano de trabalho foi
elaborado e executado na perspectiva de
desenvolver um produto capaz de atender
a uma necessidade específica de um grande
número de pesquisadores que fazem uso
de embriões de peixe-zebra em ensaios de
exposição a moléculas de natureza química
diversa para investigações de toxicidade,
teratogenicidade, carcinogenicidade, dentre
outras.
Neste âmbito, uma das principais
dificuldades enfrentadas por pesquisadores
durante a utilização de embriões de peixe-
zebra, diz respeito à presença da membrana
externa acelular que envolve o embrião, o
córion. Este envoltório possui poros capazes,
muitas vezes, de restringir a absorção de
determinadas substâncias de alta massa
molecular, sendo pouco permeável a essas
substâncias (HENN e BRAUNBECK, 2011).
Portanto,
essa
característica
implica
diretamente no uso dos embriões em testes
de exposição que têm por objetivo avaliar os
efeitos de macromoléculas como proteínas e
peptídeos sobre esses organismos nos mais
diversos aspectos, tornando necessária a
remoção do córion, processo conhecido como
decorionação.
A decorionação pode ser feita através
de dois métodos principais: mecânico ou
manual, e enzimático. O método mecânico
consiste na remoção do córion utilizando
fórceps ou pinças, e o método enzimático
se dá através da utilização de proteases.
Ambos os métodos envolvem uma agressão
intensa ao embrião, acarretando uma alta
taxa de mortalidade (HENN; BRAUNBECK,
2011). Além do mais, as enzimas proteolíticas
utilizadas no método enzimático são de custo
elevado. Por conseguinte, há uma lacuna
no mercado de produtos científicos de um
produto específico para decorionação de
embriões de peixe-zebra, abrindo uma janela
de oportunidade para o desenvolvimento de
um kit composto por reagentes específicos
e enzimas proteolíticas com baixo custo de
produção.
Uma fonte bastante promissora de
enzimas proteolíticas de baixo custo, são as
peptidases provenientes do látex da espécie
vegetal Calotropis procera, uma planta
abundante no semiárido nordestino e obtida
facilmente (FREITAS et al., 2007; VIANA,
2015). Essas peptidases têm sido utilizadas
para diversos fins, o que inclui a curtição de
couro e a coagulação de proteínas do leite
para produção de queijo (SILVA, 2016). Neste
âmbito, o presente plano teve como objetivos
geral contribuir para as atividades de criação,
manejo e pesquisa com peixe-zebra a partir
do desenvolvimento de um kit contendo
peptidases do látex da espécie vegetal C.
procera adequado para decorionação de
embriões para testes específicos. Já os
objetivos específicos foram: 1) Confirmar
a identidade das frações proteicas ricas
em peptidases cisteínicas do látex de C.
procera; 2) Avaliar a atividade proteolítica
total das amostras de peptidases cisteínicas
e da amostra de Pronase®, utilizada como
controle; e, 3) Avaliar a capacidade e a
eficiência das peptidases cisteínicas do látex
de C. procera e da Pronase® na remoção do
córion de embriões de peixe-zebra.
Fundamentação Teórica
O peixe-zebra vem ganhando posição
de destaque como organismo modelo para
estudos de biologia do desenvolvimento,
bioquímica,
fisiologia,
farmacologia,
genética
molecular,
neurociência
e
toxicologia (GERHARD, 2003; CARVALHO et
al., 2006; ADATO et al., 2011; GOLDSTEIN;
KING, 2016). Os primeiros trabalhos
utilizando o peixe-zebra foram relacionados
à biologia do desenvolvimento. A produção de
ovos translúcidos, a grande prole e o rápido
desenvolvimento (2 meses) possibilitaram
Série Iniciados v. 23
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