Avaliação dos efeitos da proteína antifúngica de Moringa oleifera, Mo-CBP3, sobre embriões de peixe-zebra( Danio rerio)
com a metodologia de Laemmli( 1970). Brevemente, a amostra foi solubilizada em tampão de amostra( Tris-HCl 0,0625 M, pH 6,8 com SDS 2 %, glicerol, azul de bromofenol e 2-mercaptoetanol) de forma a conter 2 mg / mL. Posteriormente, a amostra foi aquecida a 100 ° C, durante 10 min, e centrifugadas a 10.000 x g, durante 5 min, a 4 ° C( Hettich, modelo Rotina 380 R, Kirchlengern, Alemanha). Em seguida, alíquotas de 20 e 10 µ L da amostra foram aplicados em poços feitos em um gel vertical de 1 mm de espessura, composto por géis de aplicação e separação que encerravam 5 % e 12,5 % de acrilamida, respectivamente. A corrida foi conduzida a uma corrente constante de 20 mA por placa, durante 1,5 h. As bandas proteicas foram coradas com solução de coomassie brilliant blue R-250 0,05 %. A descoloração foi feita com solução de metanol, ácido acético glacial e água( 1: 3,5: 8, v / v / v, respectivamente). Foram utilizados marcadores de massa molecular, para que fossem estimadas as massas moleculares das proteínas analisadas. Dentre esses marcadores estão: fosforilase B( 97,0 kDa), albumina sérica bovina( 66,0 kDa), anidrase carbônica( 30,0 kDa), inibidor de tripsina( 20,1 kDa) e alfa-lactalbumina( 14,4 kDa).
Na Figura 1 está mostrado o perfil eletroforético da Mo-CBP 3 que se apresenta com uma banda de maior massa molecular aparente, próxima a 20,1 kDa, e duas bandas menores abaixo de 14,4 kDa. Esse perfil de bandas é próprio da proteína Mo-CBP 3, como já descrito na literatura, a qual é composta por duas subunidades ligadas por pontes dissulteto que se quebram quando expostas a agentes redutores( BATISTA et al., 2014).
Figura 1. Eletroforese em gel de poliacrilamida 12,5 % em condições desnaturantes da proteína Mo-CBP 3
. Marcador: fosforilase B( 97,0 kDa), albumina sérica bovina( 66,0 kDa), anidrase carbônica( 30,0 kDa), inibidor de tripsina( 20,1 kDa) e alfa-lactalbumina( 14,4 kDa);
Mo-CBP 3
20 ug: injetados 20 ug de Mo-CBP 3 no poço; e MoCB-P3 10 ug: injetados 10 ug de
Mo-CBP 3 no poço.
Fonte: Elaborado pelo autor.
Série Iniciados v. 23
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