Avaliação dos efeitos da proteína antifúngica de Moringa oleifera , Mo-CBP3 , sobre embriões de peixe-zebra ( Danio rerio )
com a metodologia de Laemmli ( 1970 ). Brevemente , a amostra foi solubilizada em tampão de amostra ( Tris-HCl 0,0625 M , pH 6,8 com SDS 2 %, glicerol , azul de bromofenol e 2-mercaptoetanol ) de forma a conter 2 mg / mL . Posteriormente , a amostra foi aquecida a 100 ° C , durante 10 min , e centrifugadas a 10.000 x g , durante 5 min , a 4 ° C ( Hettich , modelo Rotina 380 R , Kirchlengern , Alemanha ). Em seguida , alíquotas de 20 e 10 µ L da amostra foram aplicados em poços feitos em um gel vertical de 1 mm de espessura , composto por géis de aplicação e separação que encerravam 5 % e 12,5 % de acrilamida , respectivamente . A corrida foi conduzida a uma corrente constante de 20 mA por placa , durante 1,5 h . As bandas proteicas foram coradas com solução de coomassie brilliant blue R-250 0,05 %. A descoloração foi feita com solução de metanol , ácido acético glacial e água ( 1 : 3,5 : 8 , v / v / v , respectivamente ). Foram utilizados marcadores de massa molecular , para que fossem estimadas as massas moleculares das proteínas analisadas . Dentre esses marcadores estão : fosforilase B ( 97,0 kDa ), albumina sérica bovina ( 66,0 kDa ), anidrase carbônica ( 30,0 kDa ), inibidor de tripsina ( 20,1 kDa ) e alfa-lactalbumina ( 14,4 kDa ).
Na Figura 1 está mostrado o perfil eletroforético da Mo-CBP 3 que se apresenta com uma banda de maior massa molecular aparente , próxima a 20,1 kDa , e duas bandas menores abaixo de 14,4 kDa . Esse perfil de bandas é próprio da proteína Mo-CBP 3 , como já descrito na literatura , a qual é composta por duas subunidades ligadas por pontes dissulteto que se quebram quando expostas a agentes redutores ( BATISTA et al ., 2014 ).
Figura 1 . Eletroforese em gel de poliacrilamida 12,5 % em condições desnaturantes da proteína Mo-CBP 3
. Marcador : fosforilase B ( 97,0 kDa ), albumina sérica bovina ( 66,0 kDa ), anidrase carbônica ( 30,0 kDa ), inibidor de tripsina ( 20,1 kDa ) e alfa-lactalbumina ( 14,4 kDa );
Mo-CBP 3
20 ug : injetados 20 ug de Mo-CBP 3 no poço ; e MoCB-P3 10 ug : injetados 10 ug de
Mo-CBP 3 no poço .
Fonte : Elaborado pelo autor .
Série Iniciados v . 23
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