A continuación, se resume el aislamiento de ácido betulinico y del β-sitosterol a partir de la corteza del árbol de “copinol” (Hymenaea courbaril) colectado en el municipio de Zacatecoluca, departamento de La Paz, El Salvador. Para llevar a cabo este estudio se emplearon diversas técnicas cromatográficas, en la elucidación estructural, se utilizaron técnicas espectroscópicas y espectrométricas incluyendo: espectrometría de Resonancia Magnética Nuclear (RMN), 1H, 13C, y Espectrometría de Masas (EM).
Por otra parte, el ß-sitosterol (ver Figura 3) es uno de los más importantes fitosteroles al igual que el campesterol, el estigmasterol, siendo probablemente el ß-sitosterol el más abundante y ampliamente distribuido.11,12 Los sitosteroles de plantas han generado un considerable interés debido a su capacidad de disminuir el colesterol13 y a su utilidad terapéutica en el tratamiento de la hiperplasia prostática benigna.14 Varios estudios han demostrado la efectividad clínica de la fitoterapia basada en fitoesteroles (principalmente ß-sitosterol) en el tratamiento de las patologías antes mencionadas, dando así soporte científico al uso tradicional y de larga data que se le ha dado en algunos países europeos.
Métodos
Recolección de material vegetal y extracción. La corteza del árbol de Hymenaea Courbaril fue recolectada en un área de las faldas del volcán de San Vicente (Chinchontepec), en la jurisdicción de Zacatecoluca, departamento de La Paz, el 20 de febrero de 2013. La corteza recolectada se sometió a un proceso de secado al aire durante 4 semanas y luego se estrujó, obteniéndose una masa de 2.7 kg a continuación se sometió a un proceso de maceración en etanol durante 10 días. El extracto etanólico obtenido se suspendió en agua, y se extrajo con diclorometano (CH2Cl2), esté se eliminó a presión reducida hasta sequedad, obteniéndose 19.0 g de extracto crudo. Posteriormente el extracto fue fraccionado mediante una columna de cromatografía a presión atmosférica, utilizando como fase estacionaria gel de sílice (Silica Gel 60, con un tamaño de partícula de 0.063 mm), y como sistema de elución, mezclas de n-hexano/acetato de etilo, 99:1 hasta una relación 50:50.
La reunión de las fracciones enriquecidas con terpenos, fue sometida a sucesivas cromatografías en columna sobre gel de sílice, cromatografía sobre Sephadex LH-20 (Cromatografía de Exclusión por Tamaño). La purificación de los productos se efectuó mediante cromatografía en capa fina preparativa.
Cromatografía en capa fina (CCF) Las cromatografías en capa fina se realizan sobre cromatofolios (20 x 20 cm) de gel de sílice tipo G de 0.20 mm de espesor, con indicador de fluorescencia UV254, de la empresa Macherey-Nagel Sil G/UV254. La detección de los productos sobre las placas se realiza por fluorescencia con luz ultravioleta a 254 y/o 360 nm.
Cromatografía en capa fina preparativa (CCFP) Se utilizan placas (20 x 20 cm) de 1 mm de espesor de gel de sílice tipo G, con indicador de fluorescencia UV254, de la empresa Macherey-Nagel SIL G-100 UV254. La cantidad de muestra a sembrar en estas placas es de unos 40 mg, usándose para la elusión diferentes mezclas de disolventes. La detección de los productos sobre las placas se realiza por fluorescencia con luz ultravioleta a 254 y/o 360 nm.
Cromatografía en columna (CC) La CC se realizó empleando gel de sílice fina de 0.063–0.200 nm de diámetro, de la empresa Macherey-Nagel. El gel de sílice se suspende en el eluyente y se compacta con una bomba de vacío. La muestra fue adsorbida en gel de sílice de 0.063 nm de diámetro.
Cromatografía de exclusión por tamaño Se utilizó como fase estacionaria la resina lipofílica Sephadex LH–20 (25–100 μm), de Sigma–Aldrich Co. El eluyente utilizado fue n-hexano–cloroformo–metanol (2:1:1).
37