Asociación de Afectados de Neurofibromatosis - Revista 72 Asociación de Afectados de Neurofibromatosis - 72 | Page 18

18 REVISTA INFÓRMATE - ACTIVIDADES NF2 y Shwannomatosis Estado de la técnica ANTECEDENTES Desde la identificación del gen NF2 en 1993, más de 4.000 pruebas genéticas se han llevado a cabo en familias afectadas de NF2 en todo el mundo no relacionadas entre sí (1108 en Manchester). La tasa de detección de variantes patógenas en el ADN de los leucocitos depende de qué generación se analiza en una familia. METODOLOGÍA Se utilizó el análisis de secuenciación masiva (NGS) y una técnica de amplificación con sonda múltiple dependiente de ligamento (MLPA) para identificar variantes patógenas en el ADN de los leucocitos y tumores en individuos que cumplen los criterios de NF2. RESULTADOS Al evaluar a miembros de segunda generación de familias con NF2, identificamos una variante patógena en 143/154 (93%), 31/154 (20%) tenían deleciones o duplicaciones detectables en MLPA. En los 11 sin una variante en la prueba estándar, se identificaron tres con inversiones que afectaron al extremo 5 (una familia) y al extremo 3 (dos familias) que requirieron un análisis genómico adicional (ambas faltaron en la prueba de ARN estándar), otros dos tuvieron traslocaciones de cromosomas identificadas en el análisis citogenético y en un caso final hubo una variante 5´UTR (c-66-65ins T) que causa un codón de iniciación temprana. Por lo tanto, las pruebas adicionales identifican una variante patógena en 149/154 (97%) de las familias de segunda generación de NF2. En casos simples (es decir, una sola aparición en una familia), la tasa de detección de mutaciones es de alrededor del 50-60% (516/951). Alrededor del 30% de las mutaciones no se detectan debido al mosaicismo. Actualmente hemos identificado 217 pacientes en mosaico, 40% por análisis de tumor. Cuando la mutación no es detectable en la sangre, podemos detectar menos de 1 % con NGS, particularmente cuando la variante es identificada con análisis de tumor. Sin embargo, es posible que las variantes aún no se detecten después del análisis dirigido. La NGS detectó la variante patógena a una frecuencia de alelo del 0,8-9% en 26/54 (48%) de muestras de ADN de leucocitos en las que Sanger no había podido confirmar esto previamente. CONCLUSIONES Un enfoque combinado con secuenciación de NGS y MLPA junto con pruebas adicionales para evaluar los extremos 5´ y 3´ del gen NF2 es una técnica altamente sensible e implica que tres no es otro gen que cause NF2 clásico en múltiples miembros de la familia. NGS es una ventaja importante en la identificación del mosaico MF2 y proporciona estimaciones para la transmisión de la descendencia. Dr. Gareth Evans, Miriam Smith, Andrew Wallace, George Burghel Medicina Genómica de la Universidad de Manchester, Reino Unido. Dr. Gareth Evans