Curva ou rampa de congelação refere-se à velocidade a que a temperatura das amostras diminui : quanto mais próximas do azoto líquido , mais rápida a curva de congelação .
Membrana celular é um componente da célula que a delimita e protege .
Morte célular é um mecanismo natural de eliminação de células desnecessárias ou danificadas .
Protocolos são guiões que explicam detalhadamente como determinada técnica laboratorial deve ser executada . É o equivalente a uma receita de cozinha . célula ( a água passa do estado líquido para o sólido ) que acabam por romper a membrana celular , causando a morte celular . Assim , para evitar esse processo , é necessário ter em consideração muitas variáveis , como a velocidade a que diminui a temperatura da célula , a concentração de células que vamos utilizar , o recipiente em que as colocamos e muito mais . No entanto , o fator mais importante para evitar a formação de cristais de gelo é o uso de umas substâncias chamadas crioprotetores , que vão causar uma desidratação parcial das células , evitando o aparecimento de cristais e , consequentemente , a morte celular . Existe uma grande variedade de crioprotetores , mas basta saber que o seu uso é imprescindível se , no final de todo o processo , quisermos obter material viável .
A Figura 1 mostra várias imagens relacionadas com o protocolo de criopreservação , como o uso de diferentes tipos de frascos para armazenar as células ( Fig . 1A ), a altura ( ou rampa ) de congelação ( Fig . 1B ), ou o tanque ( designado criobanco ) onde as amostras são finalmente armazenadas ( Fig . 1C ).
Figura 1 . ( A ) Tipos de frascos de armazenamento ( palhinhas e criotubos ). ( B ) Criotubos em nitrogénio líquido durante o processo de congelamento . ( C ) Palhinhas no criobanco com gâmetas congelados no seu interior .
Crioprotetores são substâncias que se utilizam para proteger , interna e / ou externamente , as amostras biológicas dos danos provocados pela diminuição abrupta de temperatura durante o processo de criopreservação .
Gâmetas são células sexuais cuja finalidade é a reprodução da espécie .
Teleósteos são uma classe de peixes que tem o esqueleto completamente ossificado , e que compreende a maior parte dos peixes ( p . ex . dourada o robalo ).
Elasmobrânquios é uma subclasse de peixes que tem o esqueleto de cartilagíneos ( não ossificado ). Este grupo inclui os tubarões , raias e peixes-serra .
Criopreservação de gâmetas de peixes
Quando se trata de criopreservar gâmetas de peixes , podemos encontrar duas disciplinas muito diferentes : a criopreservação de gâmetas masculinos ( espermatozoides ) e gâmetas femininos ( oócitos ). No caso dos gâmetas masculinos , já se desenvolveram vários protocolos que permitiram a criopreservação de espermatozoides de mais de 200 espécies de peixes teleósteos e elasmobranquios . No entanto , todos os estudos mostram a existência de uma grande variabilidade de resultados entre espécies , populações , indivíduos da mesma população e até mesmo entre amostras do mesmo indivíduo recolhidas em épocas diferentes . Assim , na criação deste tipo de protocolos , é essencial ter em conta as características específicas dos espermatozoides de cada espécie ( p . ex . volume , tamanho , etc .), de forma a determinar os parâmetros mais adequados ( p . ex . tipo de crioprotetor , concentração celular ) para otimizar o processo de criopreservação .
Por outro lado , e desde que as técnicas de armazenamento a longo prazo começaram a ser aplicadas na conservação dos recursos aquáticos , a criopreservação de oócitos ( gâmetas femininos ) e embriões de peixes está hoje na fronteira do conhecimento científico . Embora alguns grupos de investigação tenham reivindicado a criopreservação bem-sucedida de embriões em espécies marinhas e de água doce , atualmente , não se encontra
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