Avaliação dos efeitos da proteína antifúngica de Moringa oleifera , Mo-CBP3 , sobre embriões de peixe-zebra ( Danio rerio )
de Moringa oleifera que apresenta potente atividade contra fungos fitopatogênicos . Por conta disso , Mo-CBP 3 tem sido considerada como uma ferramenta promissora para ser incorporada em plantas transgênicas para conferir resistência ao ataque desses fitopatógenos . Previamente , o nosso grupo de pesquisa demonstrou através de estudos in silico e in vitro que Mo-CBP 3 é provavelmente uma proteína alergênica ( Pinto et al ., 2015 ). Contudo , Mo-CBP 3 já está sendo alvo de modificações estruturais a fim de livrá-la de seus epítopos alergênicos . Em paralelo , outros estudos precisam ser realizados para avaliar os impactos de Mo-CBP 3 sobre o ambiente .
Nesse âmbito , estudos ecotoxicológicos utilizando o embrião de peixe-zebra ( Danio rerio ) têm-se referido a esse organismo como um bom modelo para avaliação dos efeitos de substâncias bioativas sobre vertebrados aquáticos ( GRISOLIA et al ., 2009 ). Recentemente , a OECD ( Organization for Economic Co-operation and Development ) recomendou um novo teste toxicológico utilizando embriões de peixe-zebra chamado de FET ( Fish Embryo Acute Toxicity Test , n º 236 de 2013 ), que se baseia em estudos de validação desenvolvidos com embriões de peixe-zebra e aplicados com sucesso para uma ampla gama de substâncias . Assim , a exposição desses embriões à Mo-CBP 3 pode contribuir para revelar os efeitos dessa proteína para o ecossistema aquático .
Diante do exposto , o presente plano teve como objetivo geral contribuir para a análise de risco ambiental da proteína antifúngica Mo-CBP 3 de sementes de M . oleifera . Já os objetivos específicos foram : 1 ) confirmar a identidade da amostra da proteína
Mo-CBP 3 de sementes de M . oleifera fornecida para este estudo ; 2 ) avaliar os efeitos tóxicos agudos de Mo-CBP 3 sobre embriões de peixezebra de uma linhagem do tipo selvagem a partir da pesquisa de sinais de letalidade e , posterior , cálculo da CL 50
( concentração letal para 50 % dos indivíduos ); e , 3 ) contribuir para o conhecimento sobre a segurança ambiental da Mo-CBP 3 para aplicação no desenvolvimento de plantas transgênicas para conferir resistência ao ataque de fungos fitopatogênicos e , ao mesmo tempo , formar recursos humanos na área de análise de risco de biomoléculas com fins de aplicação biotecnológica .
Fundamentação teórica
Há muitos anos vários grupos de pesquisa brasileiros vêm se dedicando à prospecção de moléculas bioativas em plantas , animais , algas e microrganismos para utilizá-las em diferentes aplicações biotecnológicas , que vão desde o desenvolvimento de novos medicamentos até a produção de plantas transgênicas ( SKIRYCZ et al ., 2016 ). As proteínas e peptídeos têm sido o foco de uma parte considerável dessas pesquisas , tendo em vista o seu amplo espectro de atividades biológicas e a facilidade de expressão heteróloga a partir da tecnologia do DNA recombinante ( DELANEY et al ., 2008 ).
Hoje , muitas proteínas são consideradas candidatas para aplicação biotecnológica , pois apresentam atividade biológica relevante no contexto da viabilidade de aplicação e modo de ação razoavelmente conhecido . Contudo , muito pouco se sabe sobre a segurança de uso dessas proteínas e peptídeos para saúde humana , o que é preocupante , pois é bastante relatado que muitos alérgenos , toxinas e antinutrientes são de natureza proteica ( DELANEY et al ., 2008 ). Aliado a isso , muitas dessas moléculas possuem aplicações que potencialmente podem causar impactos aos ecossistemas , tais como o desenvolvimento de plantas transgênicas expressando proteínas exógenas ativas contra fitopatógenos , mas que podem também apresentar efeitos sobre espécies não-alvo ( TABASHNIK et al ., 2012 ). Dessa forma , estudos precoces de avaliação de risco dessas proteínas , seja para segurança humana / animal ou para os ecossistemas através do uso de organismos biomarcadores , podem fomentar o uso dessas moléculas como ferramentas seguras para o desenvolvimento de produtos biotecnológicos ( FARIAS et al .,
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