Seleção e caracterização de estirpes de rizóbios para inoculação de feijão-caupi
sucessivas em álcool (70%) por 30 segundos,
seguidas de hipoclorito de sódio (2,5%)
por 30 segundos e sete lavagens com água
destilada esterilizada em autoclave a 121°C
por 20 minutos.
Após a desinfestação, os nódulos
foram esmagados com um bastão de vidro
previamente autoclavado a 121ºC por 20
minutos, posteriormente foram inoculados
em placas de petri contendo meio ágar
levedura-manitol com vermelho congo
(LMV) (VINCENT, 1970) visando-se a
obtenção de colônias bacterianas isoladas.
Estes isolados foram re-inoculados
em placas com meio LMV sucessivamente
para purificação da cultura, até a obtenção de
colônias com características homogêneas e
persistentes. Para se ter uma boa visualização
das colônias para caracterização, cada
isolado foi diluído 6x em solução salina
e re-inoculados para a caracterização
morfológica.
A avaliação da morfologia das
colônias foi realizada a partir da inoculação
dos isolados diluídos 6x, em placas de Petri
contendo meio de cultivo LMV, com pH 6,8
a partir de 24 horas da incubação a 28°C,
sendo avaliado o tamanho, forma, elevação,
bordas (lisa ou irregular), superfície (lisa
ou granular), cor, densidade ótica (opaca,
translúcida, transparente) e consistência ao
toque com alça (gomosa, pastosa, viscosa
ou aquosa). Também foi realizado teste
de Gram. Ao final os dados tabelados da
caracterização morfológica dos isolados no
software Excel, foram utilizados para geração
de dendrograma de similaridade de Jaccard.
negativo. Esta contaminação dos tratamentos
controle pode ter sido ocasionada pelo tempo
de autoclavagem dos substratos tendo em
vista que a areia antes de autoclavar já estaria
contaminad a com bactérias do grupo rizóbio
que sobreviveram a autoclagem de 121ºC a
90 minutos ou causados pelas condições
do ambiente já que o experimento foi
conduzido em condições semi controladas
se assemelhando a condições de campo.
Conforme Mazaro et al. (2007) que avaliou
o tempo de autoclavagem do substrato com
intervalo, constatou que duas autoclagens
de 30 minutos a 121ºC com um intervalo
entre as duas de 24 horas, possibilita a
completa esterilização do substrato, onde os
microrganismos que resistiram a primeira
exposição ao calor e pressão, não suportam
uma segunda exposição.
Contudo os resultados coletados
ao final da caracterização morfológica dos
isolados (Tabela 2) demonstraram um total
de 37 isolados provenientes dos nódulos
das plantas mais um isolado da estirpe
recomendada, que foram agrupados em
oito grupos geneticamente semelhantes de
acordo com o dendrograma (Figura 2).
De acordo com os resultados obtidos
após os 40 dias, pode-se constatar que
todos os tratamentos estavam com nódulos,
com exceção da segunda repetição do
tratamento sem nitrogênio Este resultado
não seria positivo se o trabalho fosse para
avaliar características das plantas como para
eficiência de nitrogênio e demais parâmetros
que necessite das plantas, tendo em vista que
não haveria controle, entretanto para fins
de seleção e caracterização microbiológica
este resultado não vem a ser considerado
Série Iniciados v. 23
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