Série Iniciados Vol. 23 | Page 100

Seleção e caracterização de estirpes de rizóbios para inoculação de feijão-caupi sucessivas em álcool (70%) por 30 segundos, seguidas de hipoclorito de sódio (2,5%) por 30 segundos e sete lavagens com água destilada esterilizada em autoclave a 121°C por 20 minutos. Após a desinfestação, os nódulos foram esmagados com um bastão de vidro previamente autoclavado a 121ºC por 20 minutos, posteriormente foram inoculados em placas de petri contendo meio ágar levedura-manitol com vermelho congo (LMV) (VINCENT, 1970) visando-se a obtenção de colônias bacterianas isoladas. Estes isolados foram re-inoculados em placas com meio LMV sucessivamente para purificação da cultura, até a obtenção de colônias com características homogêneas e persistentes. Para se ter uma boa visualização das colônias para caracterização, cada isolado foi diluído 6x em solução salina e re-inoculados para a caracterização morfológica. A avaliação da morfologia das colônias foi realizada a partir da inoculação dos isolados diluídos 6x, em placas de Petri contendo meio de cultivo LMV, com pH 6,8 a partir de 24 horas da incubação a 28°C, sendo avaliado o tamanho, forma, elevação, bordas (lisa ou irregular), superfície (lisa ou granular), cor, densidade ótica (opaca, translúcida, transparente) e consistência ao toque com alça (gomosa, pastosa, viscosa ou aquosa). Também foi realizado teste de Gram. Ao final os dados tabelados da caracterização morfológica dos isolados no software Excel, foram utilizados para geração de dendrograma de similaridade de Jaccard. negativo. Esta contaminação dos tratamentos controle pode ter sido ocasionada pelo tempo de autoclavagem dos substratos tendo em vista que a areia antes de autoclavar já estaria contaminad a com bactérias do grupo rizóbio que sobreviveram a autoclagem de 121ºC a 90 minutos ou causados pelas condições do ambiente já que o experimento foi conduzido em condições semi controladas se assemelhando a condições de campo. Conforme Mazaro et al. (2007) que avaliou o tempo de autoclavagem do substrato com intervalo, constatou que duas autoclagens de 30 minutos a 121ºC com um intervalo entre as duas de 24 horas, possibilita a completa esterilização do substrato, onde os microrganismos que resistiram a primeira exposição ao calor e pressão, não suportam uma segunda exposição. Contudo os resultados coletados ao final da caracterização morfológica dos isolados (Tabela 2) demonstraram um total de 37 isolados provenientes dos nódulos das plantas mais um isolado da estirpe recomendada, que foram agrupados em oito grupos geneticamente semelhantes de acordo com o dendrograma (Figura 2). De acordo com os resultados obtidos após os 40 dias, pode-se constatar que todos os tratamentos estavam com nódulos, com exceção da segunda repetição do tratamento sem nitrogênio Este resultado não seria positivo se o trabalho fosse para avaliar características das plantas como para eficiência de nitrogênio e demais parâmetros que necessite das plantas, tendo em vista que não haveria controle, entretanto para fins de seleção e caracterização microbiológica este resultado não vem a ser considerado Série Iniciados v. 23 101