İyonik bağlama; iyon değiştirme özelliğine sahip
suda çözünmeyen taşıyıcılara enzimin iyonik olarak
bağlanması esasına dayanır. Enzim ile taşıyıcı
arasındaki bağ kovalent kadar kuvvetli olmadığından
enzim taşıyıcıdan ayrılabilir (Telefoncu, 1997).
Şelat bağlama yönteminde; geçiş metalleri kullanılır.
İmmobilizasyon metalin boş d orbitali ile enzimin
aminoasit grupları arasında gerçekleşir (Yıldırım,
2010).
Kovalent bağlama yöntemi; enzim
immobilizasyonunda en çok kullanılan
yöntemlerdendir.
Kovalent bağlama yönteminin avantaj ve dezavantajları
Biyospesifik bağlama; koenzimler, inhibitörler, antikor gibi bileşiklerle enzimler arasında biyospesifik
etkileşim esasına dayanır (Telefoncu, 1997).
2.1.2. Tutuklama
Tutuklama yöntemi; enzimi belli bir bölgede
durmaya zorlamaktır. Enzim bulunduğu yerde
hapsolur ve başka bir yere çıkamaz. Bu işlem polimer
matriks içerisinde gerçekleşebileceği gibi yarı
geçirgen membranlar içerisinde mikrokapsülleme ve
miseller ile de gerçekleştirilebilir. Bu yöntemi diğer
immobilizasyon yöntemlerinden ayıran en önemli
özellik enzimin taşıyıcıya fiziksel veya kimyasal
olarak bağlanmamış olmasıdır (Bickerstaff, 1997).
Tutuklama yönteminin avantaj ve dezavantajları
Tutuklama yöntemi; jelde tutuklama,
mikrokapsülleme ve lipozom tekniği olmak üzere üç
grupta incelenir.
Polimer matriksde tutuklama yöntemi; çapraz bağlı
polimerin enzim çözeltisi içerisinde oluşturulmasına
esasına dayanır. Bu yöntemde en çok kullanılan
polimer N,N’-metilenbisakrilamid ile çapraz
bağlanan poliakrilamiddir.
Mikrokapsülleme yöntemi; bir enzimin yarı geçirgen
membran içinde tutuklanması esasına dayanır.
Mikrokapsüllerin büyüklükleri 1-100 µm arasında
değişmektedir. İmmobilizasyonda kullanılacak
olacak membranın; gözenek boyutu substrat
molekülünün kapsülün girişine ve çıkışına olanak
verecek boyutta olmalıdır. Substrat ne kadar küçükse,
immobilize edilmiş yapının verimliliği de o kadar
yüksek olur.
Lipozom yöntemi; lipitlerden oluşmuş sıvı-
yüzey aktif madde membranı içine tutuklama
yapılması esasına dayanır. Bu yöntemin avantajı;
aynı anda birden çok enzimin immobilizasyonu
gerçekleştirilebilirken dezavanajı ise işlem sırasında
enzimin inaktive olması ve enzim kaçışı olasılığıdır.
25