Işık Mikroskobu
Birçok boyama tekniğinde çekirdek gibi belirli yapılar görünür hale gelirken hücrenin diğer bölümleri renksiz olarak
kalır. Bu gibi durumlarda daha ayrıntılı bilgi edinmek amacıyla karşıt boyama uygulanır. Karşıt boyama genellikle çekirdek ve diğer yapıların daha iyi tanınabilmesi için kullanılan
tekli bir boyamadır. H&E boyamasında, eozin hematoksilenin
karşıt boyasıdır.
Hücrenin lipitten zengin yapıları, ısı, organik çözücüler ya da
parafin gibi lipitin dokudan uzaklaştırılmasına yola açan basamaklardan kaçınılarak, en iyi şekilde lipitte çözünebilen boyalar
ile ortaya çıkarılır. Tipik olarak, donmuş kesitler alkol çözeltisi ile
doyurulmuş lipit sever ve hücrenin lipitten zengin yapıları içerisinde eriyen, Sudan siyahı gibi boyalarla boyanır. Kolesterol,
fosfolipitler ve glikoproteinleri göstermek için özel yöntemlerin
kullanılması, hücre içerisinde farklı tiplerdeki lipit birikimlerinin
varlığı ile seyreden metabolik hastalıkların tanısında yararlıdır.
Dokuların boyanmasının yanı sıra, genellikle gümüş tozu çözeltilerinin kullanıldığı metal emdirme teknikleri, merkezi sinir
sisteminin ara madde lifleri ve özelleşmiş hücresel bileşenlerin
kesin olarak görüntülenebilmesi için yaygın olarak kullanılan bir
yöntemdir.
Dokunun tespit edilişinden ışık mikroskobunda incelenmesine kadar gerçekleştirilen tüm işlemler, dokunun büyüklüğüne, tespit maddesi, gömme ortamı ve boyama yöntemlerinin türüne göre 12 saatten 2.5 güne kadar sürebilir. Mikroskobik incelemeden önceki son basamak, boyanan kesitin üstünün temiz bir lamelle kapatılmasıdır.
iIŞIK MİKROSKOBU
Geleneksel ışık mikroskopisi, floresan, faz-kontrast, ayrımlı
(diferansiyal) girişim, konfokal ve polarizasyon mikroskoplarında olduğu gibi, doku bileşenleri ve ışığın, karşılıklı etkileşimi esasına dayanır ve farklı yollarla doku özelliklerini açığa çıkartıp çalışmak amacıyla kullanılır.
Aydınlık-Alan Mikroskobu
Aydınlık-alan mikroskobu, histoloji öğrencileri tarafından
yaygın olarak kullanılır, boyanmış preparatlar, görünür ışığın
doku içerisinden geçirilmesi esasına dayanarak incelenir. Mikroskop bir optik sistem ve bir de hareket ile örneği odaklayan bir
mekanizma içerir (Şekil 1-3). Optik parçalar üç tane mercekten
oluşur. Kondansatör, incelenecek olan nesneyi aydınlatan bir
ışık demetini toplar ve odaklar. Objektif mercekleri, nesnenin
görüntüsünü genişletir ve oküler yönünde yansıtır. Toplayıcı
mercek ya da oküler lensler görüntüyü daha da büyüterek gözlemcinin retinasına ya da çok düşük ışık seviyelerine duyarlı,
monitör ve kameralı bir yük-iliştirilmiş cihaz (CCD) üzerine
düşürür. Toplam büyütme, objektif ve oküler merceklerinin
büyütme güçlerinin toplamı ile elde edilir. Bir ışık mikroskobu
ile net ve ayrıntılı bir görüntünün elde ed