Dokuların Hazırlanması
Tamponlanmış izotonik çözelti içerisinde % 37’lik formaldehit, ışık mikroskopisi için yaygın olarak kullanılan bir tespit
maddesidir. Birçok doku bileşeninin tespit edilmesinde kullanılan yöntemlerin kimyası oldukça karmaşıktır ve iyi anlaşılamamıştır. Gerek formaldehit, gerekse glutaraldehit elektron mikroskobu yönteminde sık kullanılan tespit maddeleridir, dokuların bozulmasını önlemek üzere doku proteinlerinin amin (NH2) grupları ile reaksiyona girerler. Glutaraldehit bir dialdehit olduğu için proteinlerde çapraz bağ oluşturabilme özelliği taşır ve tespit işleminin etkinliğini güçlendirir.
Çok küçük yapıların, çok daha yüksek büyütme ve çözme
gücü ile incelenmesine olanak sağlayan elektron mikroskopide
tespit ince yapı düzeyindeki ayrıntıları ortaya koymak için titizlikle yapılmalıdır. Bu amaçla, tamponlanmış glutaraldehit çözeltisini takiben tamponlanmış osmium tetroksid çözeltisinin kullanıldığı ikili tespit uygulanır. Bu, dokuları benzer çalışmalara hazırlamak için kullanılan standart bir yöntemdir. Osmium tetroksid zar
lipitlerini proteinler kadar iyi tespit eder (ve boyar).
Gömme ve Kesit Alma
Dokular, kesitlerin alınabilmesini sağlamak amacıyla katı bir ortam içerisine gömülürler. Çok ince kesitlerin alınabilmesi, tespit
işleminden sonra dokuların sert bir kıvam alabilmesi için gömme
materyalinin doku içine yedirilmesini gerek