4
INTRODUCCIÓN
Los métodos que se usan en virología son tratados aquí con el propósito de brindar una aproximación teórica a las técnicas que han sido utilizadas para estudiar los virus. Muchos de estos métodos hacen parte no solo de la investigación en virología, sino también del diagnóstico de enfermedades virales en animales y plantas.
Aislamiento del virus
Empleo: aislamiento e identificación del virus.
Durante la fase aguda de la enfermedad es el mejor momento para demostrar y aislar virus. A medida que la enfermedad avanza, se desarrollan los anticuerpos, se reduce la excreción de virus y el virus es despejado de los tejidos.
Las manifestaciones clínicas de la enfermedad generalmente encausan la selección de la muestra clínica apropiada, tales como hisopos nasales y oculares en las infecciones de las vías respiratorias altas, heces de infecciones entéricas, sangre de infecciones sistémicas, etc.
Los virus requieren de células vivas para poderse replicar. En el laboratorio, se proporcionan células vivas como cultivos celulares, cuyas células han sido obtenidas por digestión enzimática de tejidos animales. Las células son cultivadas en superficies de vidrio o plástico.
Cuando las muestras clínicas que contienen virus son inoculadas en cultivos celulares susceptibles, el virus (si está viable) se replica y a menudo produce un comportamiento característico de patología celular, caracterizado por cambios en la apariencia celular, llamado efecto citopático (CPE por sus siglas en ingles). En algunos casos, el virus se replica sin ningún efecto apreciable sobre las células y debe ser demostrado mediante pruebas de tinciones especiales que revelan cuerpos de inclusión viral o anticuerpos fluorescentes (AF), para detectar antígenos virales. El tiempo requerido para el aislamiento del virus fluctúa entre menos de 24 horas y hasta varias semanas.
Según Carter et al. (2005).