Diagnósticos Moleculares
Técnica Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés) fue desarrollada por Kary Mullis en 1985; esta técnica permite la síntesis específica y exponencial de una región determinada de ADN mediante el uso de primers o iniciadores (secuencias específicas de nucleótidos) que hibridan con la secuencia blanco dejando un extremo 3´OH libre requerido para que la ADN polimerasa termoestable (Taq polimerasa) inicie la síntesis de la cadena de ADN complementaria en dirección 5’ 3’. La PCR es un proceso cíclico donde la muestra de ADN inicialmente es desnaturalizada para obtener cadenas sencillas, esto se consigue por calentamiento generalmente a una temperatura de 94ºC por un lapso de 30 segundos a 5 minutos; la hibridación de los iniciadores se realiza reduciendo la temperatura entre 40ºC y 65ºC (dependiendo de la longitud de la región a amplificar) y después del primer paso de hibridación la temperatura se aumenta a 72ºC para favorecer la acción de la ADN polimerasa, repitiéndose el ciclo un determinado número de veces. El proceso permite que cada amplificado sirva como molde para las subsecuentes rondas de amplificación (Pelt-Verkuil, et al., 2008). La PCR es altamente sensible, específica, eficiente y reproducible permitiendo la identificación y caracterización de especies mediante el diseño adecuado de iniciadores específicos (Rampersad et al, 2003; Rojas et al, 2000; Li, 2004).
MrSimpleScience. (2012). PCR - Polymerase Chain Reaction - Simple Animated Tutorial [Video]. (s.l.). Recuperado de: https://www.youtube.com/watch?v=DkT6XHWne6E
Según Uribe (2012).
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