Virología Octubre 2017 | Page 21

Hibridación del ácido nucleico

•Una sondas de referencia (molécula de ADN o ARN de cadena sencilla de origen conocido – conteniendo la secuencia de nucleótidos específica del virus blanco – marcada con una enzima o átomo radioactivo) es añadida a la membrana.

•Ocurre la formación de uniones de hidrógeno entre las bases complementarias.

Las sondas de referencia que no reaccionaron son removidas mediante lavado y se detecta la hibridación mediante un ensayo para detectar a la sondas de referencia.

Se emplean diferentes formas de ensayos de hibridación de fase sólida:

Hibridación de Southern. Es una técnica empleada para identificar la presencia de un fragmento específico de ADN.

Hibridación de Northern. Se emplea para detectar secuencias específicas de RNA.

Hibridación de mancha (Dot Blot). Es un proceso similar al Southern y al Northern y puede emplearse para detectar tanto ADN como ARN. La diferencia es que el ácido nucleico es colocado dentro de la nitrocelulosa en un aparato que se enfoca sobre los puntos individuales en áreas de concentración, parecido a las placas microtituladoras.

Según Carter et al. (2005).

Biology Exams 4 U. (s.f.). Westhern Blotting- Principle, Procedure and Applications [Imagen]. (s.l.). Recuperado de:

http://www.biologyexams4u.com/2014/01/western-blotting-principle-summary-of.html#.WfLYOlv9S1s

Biology Exams 4 U. (s.f.). Southern Blotting- Principle, Procedure and Applications [Imagen]. (s.l.). Recuperado de:

http://www.biologyexams4u.com/2013/12/southern-blotting-principle-procedure.html#.WfLKalv9S1s

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