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C
PCR quantitativo em tempo real técnica de análise quantitativa da expressão génica baseada no princípio da reação de cadeia da polimerase ( PCR , polymerase chain reaction ), acoplado a um sistema de deteção e quantificação do produto obtido durante os ciclos de amplificação . Os níveis de expressão do gene estudado devem sempre ser normalizados pela expressão de um outro gene cuja expressão não varie devido às nossas condições experimentais , para validação dos resultado . Neste trabalho usamos os genes que codificam a Beta- 2-Microglobulina ( B2M ) ( Fig . 1 ), a Ciclofilina ou a Hipoxantina fosforibosiltransferase 1 ( Hprt ) ( Fig . 2 )
Modelos db /+ e db / db os ratos db / db são utilizados como um modelo animal de obesidade , resistência à insulina e diabetes . Os ratos db /+ não se tornam diabéticos em nenhum momento durante a sua vida , sendo por isso utilizados como o grupo controlo
Tecido adiposo gordura que temos no nosso corpo . Este é composto maioritariamente por células chamadas adipócitos , ricas em gordura
Figura 1 . Expressão diferencial de PLA2G16 . ( A ) Gráfico vulcão da expressão génica . Dos 49396 conjuntos de sondas analisados no microarray , apenas um conjunto de sondas atingiu nosso limite de significado estatístico para expressão diferencial entre indivíduos com DAP ( PAD ) e indivíduos saudáveis ( Healthy ).( B ) Expressão do gene PLA2G16 em indivíduos saudáveis e pacientes PAD . ( C ) Análise quantitativa da expressão de PLA2G16 em biópsias de músculo gastrocnémio de indivíduos saudáveis ( Healthy , n = 9 ) e indivíduos DAP ( PAD , n = 15 ), normalizado para Beta-2-Microglobulina ( B2M ). *** significa que o resultado é estatisticamente significativo , ou seja , existem diferenças na expressão de PLA2G16 entre os grupos .
A expressão de Pla2g16 não diferiu no músculo isolado de nenhum dos modelos testados , os quais incluíram ratos com obesidade induzida pela dieta rica em gorduras ( Fig . 2A ), ratos com resistência à insulina induzida pela infusão de um inibidor do recetor da insulina ( Fig . 2B ), e ratos diabéticos db / db ( Fig . 2C – Membro não lesado , círculos abertos ). Para testar o impacto da isquemia na expressão de Pla2g16 , realizamos a ligação da artéria femoral , que reduziu de forma aguda o fluxo sanguíneo na perna afetada em ambos grupos de ratos controlo ( db /+) e diabéticos ( db / db ). Verificou-se que a recuperação do fluxo sanguíneo após a intervenção foi significativamente menos bem-sucedida nos ratos diabéticos em comparação com o grupo controlo . Em ambos os grupos , verificou-se a expressão significativamente reduzida de Pla2g16 no músculo da perna sujeita a lesão isquémica aguda , em comparação com a perna não intervencionada ( Fig . 2C ). A redução na expressão de Pla2g16 na perna sujeita à ligação da artéria femoral foi significativamente maior em ratos diabéticos em comparação com ratos controlo , mais notavelmente no dia 3 , mas esta diferença desapareceu no dia 31 ( Fig . 2C – Membro lesado , círculos fechados ).
Conclusões
Neste trabalho identificamos que pacientes com DAP têm regulação
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