Revista de Medicina Veterinaria e Investigación Revista Medicina Veterinaria e Investigación N°2 | Page 24

Realizar buena selección de los complejos cúmulos
ovocitos, colectados de ovarios extirpados, será
determinante para la obtención de buenos
porcentajes de desarrollo embrionario a blastocisto.
De la selección de ovocitos excelentes se han
obtenido tasas de división embrionaria de 37% y
30,9%, 24% y 6,5% de formación de mórulas,
blastocistos
y
blastocistos
expandidos
respectivamente, mientras que ovocitos clasificados
de baja calidad han entregado tasas de 0,8% y 0,3% de
división y formación de mórulas respectivamente
(Franzosi et al., 2003). Sananmuang et al. en el 2010,
obtuvieron entre un 50 a un 74% de maduración de
CCOs in vitro y entre un 20 a 36% de blastocistos luego
de fecundación in vitro.
gatas a través del número y calidad de los complejos
cúmulos ovocitos (CCOs) recuperados.
Materiales y Método
Durante los meses de abril a junio, se obtuvieron 28
ovarios de gatas adultas mayores a un año de edad,
de ovariohisterectomías realizadas en el Hospital
Clínico de la Universidad San Sebastián y del Centro de
Esterilización Canina de Puerto Montt. Los ovarios
fueron colectados y transportados, dentro de tubos
de plástico de 50 ml contendiendo solución de Cloruro
de Sodio al 0,9%, al laboratorio para ser procesados
dentro de la hora siguiente a las cirugías. Cada uno de
los ovarios fue procesado en forma alternada en uno
de los dos métodos siguientes: Método de corte
(n=14), realizado dentro de una placa de Petri de
vidrio, con la ayuda de una hoja de bisturí N°13 para
cortar el ovario a lo largo y ancho en múltiples trozos,
bajo solución de cloruro de sodio al 0,9%, donde luego
fueron buscados los CCOs. Método de aspiración
(n=14) donde el ovario fue puncionado y aspirado en
diferentes lugares de la corteza ovárica utilizando una
aguja 23G x 1” unida a una jeringa de 3 ml cargada con
1 ml de solución de cloruro de sodio al 0,9%, luego el
contenido aspirado fue colocado en una placa de Petri
para posteriormente buscar los CCOs bajo lupa
estereoscópica. Los CCOs colectados fueron
cuantificados y clasificados de acuerdo a Wood y
Wildt (1997), donde los CCOs grado I (Excelentes), son
ovocitos con citoplasma de color oscuro y uniforme, y
cubiertos por más de 5 capas de células del cumulus
muy compactadas. Los CCOs grado II (Buenos), son
ovocitos con citoplasma uniformemente oscuro y
menos de 5 capas de células del cumulus. Los CCOs
grado III (regulares), son ovocitos que carecen de
uniformidad en el color del citoplasma y poseen una
escasa cubierta de células de la corona radiata y
algunas células del cumulus, que no estarían
fuertemente compactados. Los CCOs grado IV
(malos), son ovocitos con transparencia notoria o
heterogeneidad de color, incompleta corona radiata y
células del cumulus, casi o totalmente desnudos. De
esta forma los ovocitos clasificados con grados I y II se
les considera como aptos para maduración in vitro y
las otras dos categorías como no aptos. Para el análisis
de los datos se utilizó la prueba de normalidad Shapiro
Wilk y luego la prueba de T de Student para comparar
ambos grupos en cuando a la cantidad de CCOs
obtenidos y la calidad se comparó utilizando una
prueba de Chi cuadrado X². El nivel de confianza
utilizado fue del 95%.
El método de colección de CCOs in vitro, se ha visto
que en algunas especies es un factor determinante en
la obtención de un buen número de ovocitos de buena
calidad y con capacidad para desarrollar embriones
luego de la fecundación. Lorenzo et al. (2015),
colectaron ovocitos en ovarios de cerda con el
método de corte y aspiración folicular, obteniendo 26
versus 12 CCOs por ovario respectivamente, no
encontrando diferencias en cuanto a los porcentajes
en la calidad de los ovocitos, sin embargo, el
porcentaje de maduración fue más alto en los
ovocitos colectados con el método de aspiración (57,5
versus 33,3 %). En tanto, Hernández et al. (2010), en
bovinos obtuvieron también mayor número de CCOs
madurables, de ovarios adquiridos en matadero, con
el método de corte versus el método de aspirado
(4,37 versus 3,24 ovocitos/ovario respectivamente),
aunque el número de ovocitos de mala calidad fue
mayor
(2,6
versus
1,3
ovocitos/ovario
respectivamente). En llamas y alpacas (Vásquez et al.
2015) reportaron también mayor número de CCOs
por ovario obtenidos con el método de corte versus el
método de aspirado folicular (8 a 10 versus 3 a 4 CCOs
respectivamente), sin embargo, no encontraron
diferencias en cuanto al porcentaje de ovocitos aptos
para
maduración
con
ambos
métodos.
Aparentemente con el método de corte, la población
de CCOs colectados sería más heterogénea, ya que se
incluirían ovocitos colectados de la ruptura de
folículos no antrales, estos si bien tendrían capas de
células del cumulus compacta, los ovocitos aún no
alcanzarían la competencia para desarrollar
embriones (Hernández et al., 2010; Lorenzo et al.
2015)
El objetivo general de este estudio fue comparar las
técnicas aspiración folicular y corte de ovarios de
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